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實驗動物細菌學監(jiān)測標準操作規(guī)程
2010-7-20
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主體內(nèi)容:1.標本的采集正常動物細菌檢測主要檢查呼吸道和腸道,分別取氣管分泌物及腸內(nèi)容物做細菌培養(yǎng)檢查。對于發(fā)病動物,采取其病變組織和臟器做細菌學檢查。2.細菌的培養(yǎng)細菌是單細胞的原核生物,絕大部分都可以在人工培養(yǎng)基上進行繁殖,只有少數(shù)例外,如泰澤病原體需在活細胞中繁殖。不同細菌種類所要求的zui適生長條件不盡相同,有些細菌需在有氧的環(huán)境下才能生長,稱為需氧菌;有些只能在無氧環(huán)境下生長,稱為厭氧菌;還有一些細菌在有氧、無氧環(huán)境下都可以生長,稱為兼性厭氧菌。培養(yǎng)細菌的目的,是從...
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淺談RT-PCR實驗方法中常見污染問題及對策
2010-7-19
2060
李軻反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術(shù),它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點,能在幾個小時內(nèi)完成從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產(chǎn)物供分析研究和檢測鑒定,所以近年來RT-PCR技術(shù)被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實驗室動物疫病檢測工作,現(xiàn)就應用RT-PCR實驗方法過程中出現(xiàn)的一些常見污染問題做如下論述,僅共同行參考和探討。RT-PCR實驗有三步:提取RNA、反轉(zhuǎn)錄(RT)、PCR擴增及擴增產(chǎn)...
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小鼠脾臟樹突細胞的分離-膠原酶消化制備脾臟細胞懸液
2010-7-16
2926
輔助方案:膠原酶消化制備脾臟細胞懸液實驗材料:1.4000U/ml膠原酶D,融化后置于冰上2.HBSS,已滅菌,含Ca+、Mg2+(購置于LifeTechnologies)3.小鼠脾臟4.皮下注射針,22G×11/2in內(nèi)徑(BectonDickinson)5.10ml、5ml一次性注射器(如BectonDickinson)6.100mm直徑培養(yǎng)皿(如Falcon)7.2個高壓滅菌鍋的鋸齒狀解剖鑷(如Roboz)8.高壓滅菌的不銹鋼網(wǎng):將40目的不銹鋼網(wǎng)剪成5cm×5cm的小...
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細胞分化與腫瘤
2010-7-13
3128
腫瘤是細胞在各種致瘤因素的作用下,基因發(fā)生改變,失去對其生長的正常調(diào)控,導致細胞異常增生。惡性腫瘤又稱為癌癥(cancer),是目前危害人類健康zui嚴重的一類疾病。我國城市地區(qū)居民死因*位為惡性腫瘤。腫瘤細胞在很多生物學特性上不同于正常細胞,也有別于修復性增生的細胞,具有明顯的去分化現(xiàn)象。一、腫瘤細胞的分化特征惡性腫瘤細胞的特征之一是分化程度低,表現(xiàn)為形態(tài)上的幼稚性,功能上的異常,細胞的多種表型(phenotype)又回到原始的胚胎細胞表型,即發(fā)生細胞的去分化現(xiàn)象。機體在致...
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細胞研究*的細胞體積分析
2010-7-6
1854
生物、藥物等許多的研究均需要通過觀察細胞體積的變化或細胞數(shù)目增減的來判斷和評估實驗的效果。由于細胞所處環(huán)境的改變可促使其自身體積做出相應的變化,以便適應改變后的環(huán)境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道該種細胞體積變化規(guī)律,因此必須檢測其體積或細胞數(shù)目隨條件、時間的變化。細胞的發(fā)育與細胞分裂周期級數(shù)遞增均需要連續(xù)不斷的細胞增殖。在培養(yǎng)液中正在增殖的細胞在其分裂前其體積將增大至原體積的兩倍。然而對細胞發(fā)育與分裂的速度作如何調(diào)整才能保證細胞體積的不變并不明確。因此,測量細胞的體積的變...
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細胞凋亡實驗
2010-7-2
1653
二、實驗原理細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合,是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸,細胞變園,細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體zui后被吞噬...